Larry Daley è il nuovo guardiano notturno al museo di storia naturale di New York. Durante un giro di controllo si accorge che creature preistoriche dagli occhi sbarrati, fieri ed antichi guerrieri, tribù ormai estinte, animali africani e leggendari eroi della storia nottetempo prendono vita. Solo la statua di cera del presidente Teddy Roosevelt sembra disposta ad aiutarlo.)